微生物限度測試是藥品、醫(yī)療器械及一次性衛(wèi)生用品質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，通過薄膜過濾法、傾注培養(yǎng)法等技術(shù)定量或定性檢測樣品中的微生物污染水平。其操作流程與技術(shù)要點如下：

一、測試依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)

?藥品/醫(yī)療器械?

依據(jù)《中華人民共和國藥典》2020年版四部，重點檢測需氧菌總數(shù)、霉菌/酵母菌總數(shù)及控制菌（如大腸埃希菌）?。

?一次性衛(wèi)生用品?

執(zhí)行GB 15979-2002《一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》附錄B，控制菌選擇依據(jù)產(chǎn)品用途調(diào)整?68。

二、核心操作流程（薄膜過濾法）

?1. 前期準(zhǔn)備?

?環(huán)境消毒?：開啟潔凈室紫外燈或臭氧發(fā)生器≥30分鐘，沉降菌檢測達標(biāo)（如TSA平板菌落≤1 CFU/皿）?。

?器具滅菌?：濾杯、鑷子、稀釋液等經(jīng)121℃高壓滅菌15-20分鐘?。

?樣品處理?：固體樣品需均質(zhì)（如10g試樣+200ml滅菌生理鹽水拍打混勻）?。

?2. 過濾操作流程?

?步驟? ?操作要點?

?濾杯滅菌? 火焰噴槍灼燒濾杯接觸面，防止交叉污染?。

?濾膜放置? 無菌鑷子取孔徑≤0.45μm濾膜，平整貼附于底座?。

?樣品加載? 傾注50-100ml試樣（純化水）或1-10ml濃縮液?。

?真空抽濾? 開啟儀器，調(diào)節(jié)流速緩慢過濾，避免濾膜破損?。

?濾膜轉(zhuǎn)移? 過濾結(jié)束關(guān)閉電源，鑷子夾取濾膜貼于培養(yǎng)基表面（如R2A瓊脂）。

?3. 培養(yǎng)與計數(shù)?

?細(xì)菌總數(shù)?：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，30-35℃培養(yǎng)48-72小時?。

?霉菌/酵母菌?：玫瑰紅鈉瓊脂或沙氏瓊脂，20-25℃培養(yǎng)5-7天?。

?質(zhì)控要求?：平行樣菌落數(shù)差異≤2倍，細(xì)菌回收率≥70%?