?一、操作前安全準備?

?環(huán)境與防護?

必須在潔凈環(huán)境（萬級背景下的百級超凈臺/無菌室）操作，提前紫外滅菌≥30分鐘并乙醇擦拭臺面

操作者需穿戴滅菌服、口罩及手套，手部用75%乙醇消毒后操作

?設備與耗材檢查?

濾膜選用0.45μm孔徑滅菌濾膜（如混合纖維素酯），過濾前后確認無破損

強酸/強堿/強腐蝕性樣品禁用，避免損傷儀器管路

?? ?二、樣品處理關鍵點?

?液體樣品?

供試液高度不超過過濾杯最大刻度，避免溢出污染14

含抑菌成分樣品（如抗生素）需添加中和劑（硫乙醇酸鹽）或增加沖洗量至≥100ml

?含顆粒物樣品?

提前去除不溶性顆粒或懸浮物，防止濾膜堵塞

固體樣品需用無菌稀釋液制成均勻懸浮液

?? ?三、過濾過程控制?

?參數設置?

真空壓力≤0.03MPa，抽濾速度需穩(wěn)定（進液管無氣泡為宜）

液層高度不足時，通過膠帽泵入沖洗液調節(jié)

?異常處理?

?濾膜無液層覆蓋?：立即取下膠帽排氣減壓

?過濾速度驟降?：檢查針頭堵塞或顆粒物殘留，降低轉速或預處理樣品

?? ?四、濾膜轉移與培養(yǎng)?

?無菌操作規(guī)范?

用滅菌鑷子將濾膜菌面朝上貼于培養(yǎng)基，確保無氣泡

轉移過程≤15秒，減少空氣暴露污染風險8

?培養(yǎng)條件?

細菌：30-35℃培養(yǎng)3天；真菌：23-28℃培養(yǎng)5天

2025版藥典新增耐藥菌（如洋蔥伯克霍爾德菌）專項檢測要求

??? ?五、設備維護與校準?

?日常維護?

每次使用后：75%乙醇沖洗濾杯及管路，121℃高壓滅菌20分鐘

每月：乙醇消毒抽氣管道，檢查雙芯針頭空氣過濾器濾膜干燥度

?定期驗證?

新樣品需做方法適用性驗證（回收率≥70%）

每季度校準真空壓力表及溫度傳感器

? ?六、安全警示?

?生物污染風險?

致病菌樣本需在生物安全柜內操作，廢棄濾膜需121℃滅菌后再處理

?應急措施?

強腐蝕液