一、核心驗證項目：覆蓋儀器性能與檢測流程

1. 儀器性能驗證：確認硬件基礎(chǔ)可靠

• 主要測試內(nèi)容：包括濾膜孔徑一致性（需符合《藥典》規(guī)定的 0.45μm 或 0.22μm）、真空度穩(wěn)定性（抽濾時真空度波動需≤±5kPa）、溫控精度（若帶培養(yǎng)功能，溫度偏差需在 ±1℃內(nèi)）。

• 關(guān)鍵判斷標準：濾膜需通過氣泡點試驗（如 0.45μm 濾膜氣泡點壓力應(yīng)≥0.2MPa），真空度與溫控需連續(xù) 3 次測試均達標，避免因硬件問題導(dǎo)致過濾不完全或微生物培養(yǎng)異常。

2. 回收率驗證：確認檢測流程無抑制

• 主要測試內(nèi)容：向已知濃度的陽性對照菌（如大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌）中加入待檢測樣品（如藥品、食品提取物），通過限度儀完成過濾、培養(yǎng)后，計算實際菌落數(shù)與理論菌落數(shù)的比值（回收率）。

• 關(guān)鍵判斷標準：回收率需在 70%-130% 范圍內(nèi)，若低于 70%，需排查樣品是否存在抑菌成分（如抗生素），或調(diào)整樣品稀釋倍數(shù)、更換濾膜類型以消除抑制作用。

3. 重復(fù)性驗證：確認結(jié)果可復(fù)現(xiàn)

• 主要測試內(nèi)容：由同一操作人員，使用同一臺限度儀，對同一樣品（含已知菌量）連續(xù)進行 6 次平行檢測，記錄每次的菌落計數(shù)結(jié)果。

• 關(guān)鍵判斷標準：6 次結(jié)果的相對標準偏差（RSD）需≤10%，若 RSD 過大，需檢查濾膜放置是否平整、抽濾速度是否穩(wěn)定，避免操作差異導(dǎo)致結(jié)果波動。

4. 適用性驗證：確認方法匹配樣品類型

• 主要測試內(nèi)容：針對不同狀態(tài)的樣品（如液體樣品、固體樣品、油狀樣品），驗證當(dāng)前的樣品前處理方法（如稀釋、乳化、溶解）能否與限度儀適配，且不影響微生物存活。

• 關(guān)鍵判斷標準：處理后的樣品需能順利通過濾膜（無堵塞、無殘留），且陽性對照菌的回收率仍符合要求，確保方法對特定樣品的適用性。

二、驗證過程中的關(guān)鍵注意事項

1. 對照試驗不可少

• 每次驗證需同時設(shè)置 “空白對照”（僅用稀釋液過濾培養(yǎng)，確認無外界污染）和 “陽性對照”（僅陽性菌過濾培養(yǎng)，確認菌液活性正常）。

• 若空白對照出現(xiàn)菌落或陽性對照回收率不達標，需先排查環(huán)境（如無菌操作臺是否滅菌）、試劑（如稀釋液是否污染）問題，再重新進行驗證。

2. 標準菌管理需規(guī)范

• 陽性對照菌需使用《藥典》規(guī)定的標準菌株（如 ATCC 菌株），且需在有效期內(nèi)復(fù)蘇、傳代，傳代次數(shù)不超過 5 代，避免菌株活性下降影響驗證結(jié)果。

• 菌液濃度需通過平板計數(shù)法預(yù)先標定，確保加入樣品的菌量準確（通常為 100-300CFU / 份），菌量過高或過低都會導(dǎo)致回收率計算偏差。

3. 數(shù)據(jù)記錄與追溯要完整

• 需詳細記錄驗證過程中的所有參數(shù)，包括儀器型號、濾膜批號、樣品信息、菌液濃度、培養(yǎng)溫度與時間、每次的計數(shù)結(jié)果等。

• 驗證報告需包含 “驗證目的、方法、結(jié)果、結(jié)論”，且需經(jīng)授權(quán)人員審核簽字，確保符合 GMP、USP 等法規(guī)對數(shù)據(jù)追溯的要求。

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